Desarrollo y caracterización de anticuerpos IgY contra péptidos sintéticos de las proteínas OMP25 y BP26 de Brucella abortus

Claudia Moreno, Noraida Zerpa, Caridad Malavé, Henry Bermúdez, Jhonny Demey, Rodolfo Fernandez Gomez, Olaf Ilzins

Resumen


La brucelosis es una zoonosis producida por especies del género Brucella. El aislamiento e identificación de la bacteria en alimentos usando las técnicas clásicas de microbiología no es práctico debido a su lenta tasa de crecimiento. Por lo tanto, es necesario establecer métodos rápidos para la detección de la bacteria en alimentos. En el presente trabajo se desarrollaron y caracterizaron anticuerpos policlonales monoespecíficos en gallinas (IgY) contra péptidos sintéticos de las proteínas OMP25 y BP26 de Brucella abortus, que puedan ser utilizados en un ensayo de captura. Para ello, se realizaron estudios conformacionales y de predicción de epítopes en la selección de los péptidos, los cuales se utilizaron como antígenos para la producción de las IgY. Los animales desarrollaron anticuerpos específicos contra los péptidos, mostrando correspondencia entre los estudios predictivos y la inmunogenicidad obtenida. Las IgY reconocieron a B. abortus en un ensayo de MABA y la actividad de unión y especificidad fue determinada por western blot con extracto celular de B. abortus. En este estudio, demostramos que los péptidos de las proteínas OMP25 y BP26 de B. abortus son buenos candidatos para la producción de anticuerpos IgY especificos capaces de reconocer proteínas de extracto de B. abortus cepa S19, indicando el potencial uso de anticuerpos IgY para el desarrollo de inmunoensayos para la detección de Brucella abortus.

Palabras clave


Brucella sp., inmunoglobulina Y, Péptidos sintéticos, Inmunodiagnóstico.

Texto completo:

PDF

Referencias


Al Dahouk S., Nockler K., Scholz H., Tomaso H., Bogumil R. & Neubauer H. (2006). Immunoproteomic characterization of Brucella

abortus 1119-3 preparations used for the serodiagnosis of Brucella infections. J Immunol Meth. 309: 34-47.

Alton G. G., Jones L. M. & Pietz D. E. (1975). Laboratory techniques in brucellosis. 163 pp. In: WHO monograph series No. 55, 2nd. Ed, World Health Organization (Ed.), Geneva, Switzerland.

Alvarez O., Montero Y., Jimenez E., Zerpa N., Parrilla P. & Malave C. (2012). IgY Antibodies Anti-Tityus caripitensis Venom: Purification and Neutralization Efficacy. Toxicon. 74: 208-214.

Arimi S. M., Koroti E., Kangethe E. K., Omore A. O. & McDermott J. J. (2005). Risk of infection with Brucella abortus and Escherichia coli O157:H7 associated with marketing of unpasteurized milk in Kenya. Act. Tropica. 96: 1-8.

Boletín Epidemiológico No. 52. (2012). Documento en linea: http://www.bvs.gob.ve/boletin_pidemiologico/2012/Boletin_52_2012.pdf. (Consultado: 2015-10-20).

Bowden R. A., Cloeckaert A., Zygmunt M. S. & Bernard G. (1995). Surface exposure of outer membrane protein and lipopolysaccharide epitopes in Brucella species studied by enzyme-linked immunosorbent assay and flow cytometry. Infect

Immun. 63: 3945-3952.

Cloeckaert A., Zygmunt M., Wergifosse P., Dubray G. & Limet J. (1992). Demonstration of peptidoglycanassociated Brucella outer-membrane proteins by use of monoclonal antibodies. J Gen Appl

Microbiol. 138: 1543-1550.

Cloeckaert A., Jacques I., Bosseray N., Limet J.N., Bowden R., Dubray G., et al. (1991). Protection conferred on mice by monoclonal antibodies directed against outer membrane antigens of Brucella. J Med Microbiol. 34: 175-180.

Cloeckaert A., Verger J., Grayon M. & Grepinet O. (1995). Restriction site polymorphism of the genes encoding the mayor 25 and 36 kDa outermembrane proteins Brucella. Microbiol. 141:2111-2121.

Cloeckaert A., Vizcaino N., Paquet J. & Bowden R. (2002). Major outer membrane proteins of Brucella spp.: past, present and future. Vet Microbiol. 90:227-249.

Cloeckaert A., Wergifosse A., Dubray G. & Limet J. N. (1990). Identification of seven surfaces exposed Brucella outer-membrane proteins by use of monoclonal antibodies: immunogold labeling

for electron microscopy and enzyme-Linked Immunosorbent Assay. Infect Immun. 58: 3980-3987.

Coelho A.C. & Garcia Diez J. (2015). Biological Risks and Laboratory-Acquired Infections: A Reality That Cannot beIgnored in Health Biotechnology. Front Bioeng Biotechnol. 3: 56.

Corbel M. J., Stuart F. A. & Brewer R. A. (1984). Observations of serological cross-reactions between smooth Brucella species and organisms of other genera. Dev Biol Stand. 56: 341.

Dean A. S., Crump L., Greter H., Schelling E. & Zinsstag J. (2012). Global Burden of Human Brucellosis: A Systematic Review of Disease Frequency. PLoS Negl Trop Dis. 6: e1865.

Deléage G., Combet C., Blanchet C. & Geourjon C. (2001). ANTHEPROT: An integrated protein sequence analysis software with client/server capabilities. Comput Biol Med. 31: 259-267.

Di Rienzo J. A., Casanoves F., Balzarini M. G., Gonzalez L., Tablada M. & Robledo C. W. (2013). Grupo InfoStat, FCA, Universidad Nacional de Córdoba, Argentina. Documento en linea: http://www.infostat.com.ar (Consultado: 2014-12-13)

Dubray G. & Charriaut C. (1983). Evidence of three major polypeptide species and two major polysaccharide species in the Brucella outer membrane. Ann Rech Vet. 14: 311-318.

French Agency for Food, Environmental and Occupational Health & Safety (2014). ANSES. Data sheet on foodborne biological hazards /Brucella spp. Documento en línea.disponible en: https://www.anses.fr/fr/system/files/BIORISK2013sa0188EN.pdf (Consultado: 2016, noviembre, 8).

Fung D.Y. (2002). Rapid Methods and Automation in Microbiology. Compr Rev Food Sci F S. 1: 1-22. Hopp T. P. & Woods K. R. (1981). Prediction of protein antigenic determinants from amino acid

sequences. Proc Natl Acad Sci. 78: 3824-3828.

Hougthen R., DeGraw, M. K., Bray S. R., Hoffman N. D. & Frizzell S. (1986). Simultaneous multiple peptides synthesis: the rapid preparation of large numbers of discrete peptides for biological, immunological and methodological studies. Biochem Tech. 4: 522–

Kim D., Park J., Kim S. J., Soh Y. M., Kim H. M., Oh B. H., et al. (2013). Brucella immunogenic BP26 forms a channel-like structure. J Mol Biol. 425:1119-26.

Klimentzou P., Paravatou-Petsotas M., Zikos C., Beck A., Skopeliti M., Czarnecki J., et al. (2006). Development and immunochemical evaluation of antibodies Y for the poorly, immunogenic polypeptide prothymosin alpha. Peptides. 27:183–193.

Kubokawa T & Nagashima B. (2012). Parametric bootstrap methods for bias correction in linear mixed models. J Multivariate Anal. 106: 1-16.

Kuplulu O. & Sarimehmetoglu B. (2004). Isolation and identification of Brucella spp. in ice cream. Food Control. 15: 511-514.

Laemmli U. (1970). Cleavage of structural proteins during the assembly of head of bacteriophage T4. Nature. 227: 680-685.

Lang R., Banai M., Lishner M. & Rubinstein E. (1995). Brucellosis. Int. J Antimicrob. Agents. 5: 203-208.

Leclerc V., Dufour B., Lombard B., Gauchard F., Garin-Bastuji B., Salvat G., et al. (2002). Pathogens in meat and milk products: surveillance an impact on human health in France. Livest Prod Sci. 76: 195-202.

Mann K. & Mann M. (2008). The chicken egg yolk plasma and granule proteomes. Proteomics. 8: 178–191.

Merrifield R. B. (1963). Solid phase peptide synthesis. I. The synthesis of a tetrapeptide. J Am Chem Soc. 85: 2149-2154.

Mukherjee F., Nagmani K., Surendra K. S. N. L., Subramanian B. M., Bahekar V. S., Prasad A., et al. (2015).Optimization and validation of a diagnostic real-time PCR for bovine brucellosis. Adv. Anim. Vet. Sci. 3: 577-587.

Munoz, P. M., Marin C. M., Monreal D., Gonzalez D., GarinBastuji B., Diaz R., et al. (2005). Efficacy of several serological tests and antigens for diagnosis of bovine brucellosis in the presence

of false positive serological results due to Yersinia enterocolitica O:9. Clin Diagn Lab Immunol. 12: 141–151.

Narat M. (2003). Production of antibody in chickens. Food Tech and Biotech. 41: 259-267. Novotny J., Handschumacher M. & Bruccoleri

R. (1987). Protein antigenicity: a static surface property. Immunol Today. 8: 26–31.

Noya O. & Alarcón de Noya. B. (1998). The multiple antigen blot assay (MABA): a simple immunoenzymatic technique for simultaneous screening of multiple antigens. Immunol Lett. 63: 53-56.

Padilla C., Montoya Y. & Carrillo C. (2003). Estandarización de una prueba de PCR para la deteccion de Brucella sp. Rev Peru Med Exp. 20: 102-104.

Parker J. M. R., Guo D. & Hodges R. S. (1986). New Hydrophilicity Scale Derived from HighPerformance Liquid Chromatography Peptide retention Data: Correlation of Predicted Surface

residues with antigenicity and X-ray-Derived accessible Site. Biochemistry. 25: 5425-5432.

Polson A., Coetzer T., Kruger J., Von Maltzahn E. & Van Merwe K. J. (1985). Improvements in the isolation of IgY from the eggs laid by immunized chickens. J Immunol Invest. 14: 323-327.

Qiu J., Wang W., Wu J., Zhang H., Wang Y., Qiao J., et al. (2012). Characterization of periplasmic protein BP26 epitopes of Brucella melitensis reacting with murine monoclonal and sheep antibodies. PLoS ONE. 7: e34246. doi: 10.1371/ journal.pone.0034246.

Rossetti O. L, Arese A. I, Boschiroli M. L. & Cravero S. L. (1996). Cloning of Brucella abortus gene and characterization of expressed 26-kilodalton periplasmic protein: potential use for diagnosis. J Clin Microbiol. 34: 165-169.

Schade R., Gutierrez E., Sarmiento R, Chacana P., Porankiewicz-Asplund J. & Terzolo H. (2005). Chicken Egg Yolk Antibodies (IgY-technology):A Review of Progress in Production and Use in Research and Human. ATLA. 33: 129–154.

Sowa B. A., Kelly K. A., Ficht T. A., Frey M. & Adams L. G. (1991). SDS-soluble and peptidoglycanbound proteins in the outer membranepeptidoglycan complex of Brucella abortus. Vet Microbiol. 27(3-4): 351-69.

Tini M., Jewell U.R., Camenisch G., Chilov D. & Gassmann M. (2002). Generation and application of chicken egg-yok antibodies. Comp Biochem Physio. 131: 569-574.

Towbin H., Stachelin T. & Gordon J. (1979). Electroforetic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets:

procedure and some applications. Proc Natl Acad Sci. 76: 4350-4354.

Van Regenmortel M. H. V. (2001). Antigenicity and Immunogenicity of Synthetic Peptides. Biologicals. 29: 209-213.

Vargas F. (2003). Situación epidemiológica de la brucelosis en Venezuela. Gaceta Cs Vet. 8: 69-78.

Vizcaíno N., Caro-Hernandez P., Cloeckaert A. & Fernandez Lago L. (2004). DNA polymorphism in the omp25/omp31 family of Brucella spp.: identification of a 1.7 kb inversion in Brucella cetacea and of a 15.1 kb genomic island, absent in Brucella ovis, related to the synthesis of smooth lipopolysaccharide. Microbes Infec. 6: 821-834.

Vizcaino N., Verger J., Grayon M., Zygmunt M. & Cloeckaert A. (1997). DNA polymorphism at theOmp31 locus of Brucella evidence for a large deletion in Brucella abortus, and other speciesspecific markers. Microbiol. 143: 2913-2921.

Voller A. (1974). A microplate method of enzyme linked inmunosorbent assay and its application to malaria. Bull WHO. 51: 209-211.

Wareth G., Melzer F., Elschner M. C., Neubauer H. & Roesler U. (2014). Detection of Brucella melitensis in bovine milk and milk products from apparently healthy animals in Egypt by real-time

PCR. J Infect Dev Ctries. 8: 1339-1343.


Enlaces refback

  • No hay ningún enlace refback.




Copyright (c) 2021 Boletín de Malariología y Salud Ambiental